[대한약전/KP] 박층크로마토그래프법 Thin-layer Chromatography

박층크로마토그래프법

Thin-layer Chromatography

박층크로마토그래프법은 적당한 고정상으로 만든 박층을 써서 혼합물을 이동상으로 전개하여 각각의 성분으로 분리하는 방법이며 물질의 확인 또는 순도시험 등에 쓴다.

Thin-layer Chromatography is a method to separate each ingredient by developing a mixture in a mobile phase, using a thin-layer made of a suitable stationary phase, and is applied for identification, purity test, etc. of substances.

박층판의 조제 

보통 다음 방법에 따른다.
5 cm × 20 cm 또는 20 cm × 20 cm의 평활하고 두께가 고른 유리판을 써서 그 한 면에 의약품각조에서 규정하는 고정상 고체의 가루를 물에 현탁한 액을 적당한 기구를 써서 0.2 ~ 0.3 mm의 두께로 고르게 도포한다. 바람에 말린 다음 105 ~ 120 ℃ 사이의 일정한 온도에서 30 ~ 60 분간 가열건조하여 박층판을 만든다. 유리판 대신 적당한 플라스틱판을 쓸 수 있다. 박층판은 습기를 피하여 보존한다.

Preparation of thin-layer plate
Generally, proceed by the following method.
A smooth glass plate of uniform thickness having a size of 5 cm × 20 cm or 20 cm × 20 cm is used for preparation of a thin-layer plate. Using a suitable apparatus, apply a water suspension of powdered solid substance for the stationary phase, as directed in the monograph, on one side of the glass plate to make a uniform layer of 0.2 to 0.3 mm in thickness. After airdrying, dry further by heating at a fixed temperature between 105 °C and 120 °C for 30 to 60 minutes. A suitable plastic plate may be used instead of the glass plate.
Preserve the dried plate with protection from moisture.

 

조 작 법 

따로 규정이 없는 한 다음 방법에 따른다.
박층판의 아래끝에서 약 20 mm 높이의 위치를 원선으로 하고 좌우 양측에서 적어도 10 mm를 띄어서 원선 위에 의약품각조에서 규정하는 양의 검액 및 표준액을 마이크로피펫 등을 써서 약 10 mm 이상의 적당한 간격으로 지름 2 ~ 6 mm의 원형상으로 점적하고 바람에 말린다. 다음에 따로 규정이 없는 한 미리 전개조의 안쪽 벽을 따라 여지를 두르고 여지를 전개용매로 적시고 다시 전개용매를 약 10 mm의 깊이로 넣어 전개조를 밀폐하여 상온에서 약 1 시간 방치하고 여기에 박층판을 기벽에 닿지 않도록 넣고 전개조를 밀폐하여 상온에서 전개한다. 전개용매의 선단이 원선으로부터 의약품각조에서 규정하는 거리까지 전개하였을 때 박층판을 꺼내어 곧 용매의 선단 위치를 표시하고 바람에 말린 다음 의약품각조에서 규정하는 방법에 따라 검액 및 표준액의 각 반점의 Rf 값, 색 등을 비교한다. 다음 식에 따라 Rf 값을 구한다.

Procedure
Unless otherwise specified, proceed by the following method.
Designate a line at about 20 mm distant from the bottom of the thin-layer plate as the starting line, make round spots of 2 to 6 mm in diameter with the directed volumes of the test solution or the standard solution in the monograph using micropipets at points on this line, separated by more than 10 mm, and air-dry. Unless otherwise specified, attach the filter paper along with the inside wall of the container, and wet the filter paper with the developing solvent. In the container, the developing solvent is placed up to about 10 mm in height from the bottom beforehand, seal the container closely, and allow it to stand for 1 hour at ordinary temperature. Place the plate in the container, avoiding contact with the inside wall, and seal the container. Develop it at ordinary temperature.

When the solvent front has ascended from the starting line to the distance directed in the monograph, remove the plate from the container. Immediately put a mark at the solvent front. After air-drying, observe the location, color, etc., of each spot by the method specified in the monograph. Calculate the Rf value by using the following equation: